MARCADORES
Vrn-A1
Este marcador permite diferenciar las variantes alélicas primaverales y el alelo salvaje invernal proveniente de mutaciones detectadas en la región del promotor del gen Vrn-A1 (Yan et al., 2004).
El alelo recesivo invernal (Vrn-A1) presenta un producto de amplificación de 350 pb. El alelo dominante primaveral (Vrn-A1a) el cual presenta una inserción en la región del promotor, y una duplicación parcial del gen Vrn-A1 muestra productos de PCR de 490 y 581 pb. Finalmente el alelo dominante primaveral Vrn-A1b el cual exhibe una deleción de 22 pb en el promotor presenta un producto de amplificación de 328 pb.
Los productos de PCR son visualizados en geles de agarosa al 2% teñidos con bromuro de etidio. La punta de flecha verde marca el fragmento de ADN de 350 pb perteneciente al alelo invernal vrn-A1 (calles 1 a 4). La punta de flecha roja indica el fragmento de 328 pb perteneciente al alelo primaveral Vrn-A1b (calles 5 y 6). Finalmente las puntas de flecha azules señalan los fragmentos de 490 y 581 pb del alelo primaveral Vrn-A1a (calles 7 a 10). La punta de flecha negra señala el fragmento de 500 pb del marcador de peso molecular de 100 pb (Biodynamics)
Primers
Vrn1aJD-F: 5′- GAA AGG AAA AAT TCT GCT CG -3′
Vrn1aMH-R: 5′- TGG TTG GGT GAG GAC GTG AGG -3′
Concentración final de productos utilizados en las reacciones de PCR:
1X Taq buffer (libre de Mg); dNTP: 200 µM c/u; MgCl2: 3.0 mM; primers: 0.2 µM c/u; Taq: 1 U; ADN genómico: 50-100 ng/reacción; Volumen final: 25 µl
Programa de PCR:
Desnaturalización: 94 °C, 4 min; Amplificación (40 ciclos); 94 °C 45 seg, 50 °C 45 seg, 72 °C 45 seg; Extensión: 72 °C 15 min
Caracterización de la Variabilidad Genética presente en Variedades Argentinas de Trigo.
s = alelo primaveral Vrn-A1a; s* = alelo primaveral Vrn-A1b; w = alelo invernal.
Aclaración: Los datos de la caracterización molecular aquí mostrados pueden contener variaciones según el origen de las semillas utilizadas, se recomienda utilizarlos de manera orientativa.
Referencias
- Yan, L., Helguera, M., Kato, K., Fukuyama, S., Sherman, J., & Dubcovsky, J. (2004). Allelic variation at the VRN-1 promoter region in polyploid wheat. Theoretical and Applied Genetics, 109(8), 1677–1686. https://doi.org/10.1007/s00122-004-1796-4