MARCADORES
Rht25
La altura de la planta es un carácter agronómico importante que posee un impacto significativo en el rendimiento, como lo demuestra el efecto positivo de los alelos enanos para el gen Rht1 sobre el vuelco e índice cosecha en las variedades liberadas durante la “Revolución Verde”. Sin embargo, estos alelos insensibles al ácido giberélico (AG) también reducen la longitud del coleóptilo, la producción de biomasa y el potencial de rendimiento en determinados ambientes lo que desencadena buscar genes de enanismo sensibles a AG alternativos.
En este sentido, el gen Rht25 que fue mapeado en el cromosoma 6A utilizando datos fenotípicos de Argentina (Mo et al., 2018) y fue recientemente clonado posicionalmente y designado como PLATZ-A1 (TraesCS6A02G156600) (Zhang et al., 2023) ofrece una oportunidad de ampliar la oferta genética para el control de este carácter.
Variantes alélicas detectadas a nivel mundial
- Rht25a: alelo normal, fenotipo alto(*).
- Rht25b: deleción de 13 pb en el exón 3 (-17.7 cm)(*).
- Rht25c: deleción de 19 pb en el exón 3 (-2.8 cm).
- Rht25d: mutaciones en el sitio de splicing en inicio del exón 3 (-9.9 cm) (*)(**).
- Rht25e: deleción de 4 pb en el tercer exón (-5.4 cm)
- Rht25f: inserción de 384 pb en la región del promotor (ns respecto alelo Rht25a) (*).
(*) Alelos detectados en el germoplasma argentino
(**) Para diferenciar el alelo Rht25d se necesita digerir los productos de PCR con la enzima Sau96I y separados en el mismo tipo de gel.
Para el marcador PCR/CAPS, los productos de amplificación son visualizados en geles de acrilamida al 6% teñidos con bromuro de etidio. A)- La punta de flecha verde marca el fragmento de ADN de 216 pb perteneciente a los alelos Rht25a, Rht25d o Rht25f (calles 1, 2, 3, 8, 10, 12 y 13). La punta de flecha celeste marca el fragmento de 203 pb perteneciente al alelo enano Rht25b (calles 4, 5, 6, 7, 9 y 11). B)- Luego de la digestión con Sau96I la punta de flecha verde indica el fragmento de 216 pb perteneciente a los alelos Rht25a o Rht25f mientras que la punta de flecha azul indica el fragmento de 194 pb perteneciente al alelo enano Rht25d.
Para el marcador del alelo Rht25f, de inserción en el promotor, los productos de amplificación son visualizados en geles de agarosa al 2% teñidos con bromuro de etidio. C)- La punta de flecha verde marca el fragmento de ADN de 157 pb perteneciente al alelo Rht25a (calles 1, 2, 4, 5, 6, 7, 9 y 10) y la punta de flecha violeta marca el fragmento de 541pb perteneciente al alelo Rht25f (calles 3 y 8)
Marcador PCR / CAPS para las variantes en la región codificante Rht25a, b, c, d, e
Primers:
PLTZ-A_CAPS_F 5′- TGT ATA TGC ATG TGT GTC TCA GC -3′
PLTZ-A_CAPS_R 5′- CCG ACG GGA CAA TTA GGC -3′
Marcador para el alelo Rht25f (inserción en la región del promotor)
Primers:
platz6A-CDC-F1 5′-CAC ATC TAC ATA CAT CCC CAT CC-3′
platz6A-CDC-F1 5′-GCA ATT CTC CTC TTG GTT GGT C-3′
Concentración final de productos utilizados en las reacciones de PCR:
1X Taq buffer (libre de Mg); dNTP: 200 µM c/u; MgCl2: 3.0 mM; primers: 0.2 µM c/u; Taq: 1 U; ADN genómico: 50-100 ng/reacción; Volumen final: 25 µl
Programa de PCR:
Desnaturalización: 94 °C, 4 min; Amplificación (40 ciclos); 94 °C 45 seg, 55 °C 45 seg, 72 °C 45 seg; Extensión: 72 °C 15 min
Caracterización de la Variabilidad Genética presente en Variedades Argentinas de Trigo.
a = alelo alto, b = alelo enano, d = alelo enano, f = alelo alto
Aclaración: Los datos de la caracterización molecular aquí mostrados pueden contener variaciones según el origen de las semillas utilizadas, se recomienda utilizarlos de manera orientativa.
Referencias
Mo, Y., Vanzetti, L. S., Hale, I., Spagnolo, E. J., Guidobaldi, F., Al-Oboudi, J., Odle, N., Pearce, S., Helguera, M., & Dubcovsky, J. (2018). Identification and characterization of Rht25, a locus on chromosome arm 6AS affecting wheat plant height, heading time, and spike development. Theoretical and Applied Genetics, 131(10), 2021-2035. https://doi.org/10.1007/s00122-018-3130-6
Zhang, J., Li, C., Zhang, W., Zhang, X., Mo, Y., Tranquilli, G. E., Vanzetti, L. S., & Dubcovsky, J. (2023). Wheat plant height locus RHT25 encodes a PLATZ transcription factor that interacts with DELLA (RHT1). Proceedings of the National Academy of Sciences, 120(19). https://doi.org/10.1073/pnas.2300203120