MARCADORES
GW2-A1
Su et al. (2011) desarrollaron un marcador molecular CAPS que permite detectar las variantes alélicas del gen GW2-A1.
En primer lugar se utiliza un conjunto de primers específicos para el genoma A Hap-6A-P1, para amplificar un fragmento de 949 pb de GW2-A1. Luego, un segundo par de primers Hap-6A-P2 fue diseñado para una segunda PCR donde se obtiene un producto de 418 pb. Por último, el producto de la segunda PCR se digiere con la endonucleasa TaqI, y se puede observar un polimorfismo de longitud de 167 pb (GW2-A1-A) vs., 218 pb (GW2-A1-G).
El alelo GW2-A1-G está asociado a un mayor peso de grano, mientras que el alelo GW2-A1-A está presente en variedades de peso de grano más pequeño (Zhang et al., 2013).
Productos de PCR separados en electroforesis en geles de agarosa al 2%.
Los productos de PCR son visualizados en geles de agarosa al 2% teñidos con bromuro de etidio.
La punta de flecha roja (calles 1, 2, 3 y 4) marca el fragmento de ADN de 218 pb perteneciente al alelo GW2-A1-G. La punta de flecha verde (calles 5, 6 y 7) marca el fragmento de 167 pb perteneciente al alelo GW2-A1-A. La punta de flecha amarilla señala el fragmento de 500 pb del marcador de peso molecular de 100 pb (Biodynamics).
Primers:
Las secuencias son las siguientes (Su et al., 2011):
Hap-6A P1
Hap-6A P1F: 5´ -CGT TAC CTC TGG TTT GGG TGT CGT G-3’ ;
Hap-6A P1R: 5’ -CAC CTC TCG AAA ATC TTC CCA ATT A-3’ .
Hap-6A-P2
Hap-6A-P2F: 5’ – GAG AAA GGG CTG GTG CTA TGG A-3’ ;
Hap-6A-P2R: 5’ – GTA ACG CTT GAT AAA CAT AGG TAA T-3’
Concentración final de productos y programa de primer PCR:
1X Taq buffer (libre de Mg); dNTP: 200 µM c/u; MgCl2: 1.5 mM; primers: 0.2 µM c/u; Taq: 1 U; ADN genómico: 50 – 100 ng/reacción; Volumen final: 25 µl
Desnaturalización: 94 °C, 5 min; Amplificación (40 ciclos); 94 °C 45 seg, 55 °C 45 seg, 72 °C 45 seg; Extensión: 72 °C 5 min.
Concentración final de productos y programa de segunda PCR:
1X Taq buffer (libre de Mg); dNTP: 200 µM c/u; MgCl2: 1.5 mM; primers: 0.2 µM c/u; Taq: 1 U; como templado se adicionaran 2 µl de la primera PCR ; Volumen final: 25 µl
Desnaturalización: 94 °C, 4 min; Amplificación (40 ciclos); 94 °C 45 segundos, 50 °C 45 segundos, 72 °C 45 segundos; Extensión: 72 °C 15 min
Programa de digestión: 10 µl de producto de la segunda PCR + 4 µl ddH2O + 1U enzima TaqI a 65 °C durante 2 horas.
Caracterización de la Variabilidad Genética presente en Variedades Argentinas de Trigo.
G = mayor peso de grano, A = menor peso de grano.
Aclaración: Los datos de la caracterización molecular aquí mostrados pueden contener variaciones según el origen de las semillas utilizadas, se recomienda utilizarlos de manera orientativa.
Referencias
Su, Z., Hao, C., Wang, L., Dong, Y., & Zhang, X. (2010). Identification and development of a functional marker of TaGW2 associated with grain weight in bread wheat (Triticum aestivum L.). Theoretical and Applied Genetics, 122(1), 211-223. https://doi.org/10.1007/s00122-010-1437-z
- Zhang, X., Chen, J., Shi, C., Chen, J., Zheng, F., & Tian, J. (2013). Function of TaGW2-6A and its effect on grain weight in wheat (Triticum aestivum L.). Euphytica, 192(3), 347-357. https://doi.org/10.1007/s10681-012-0858-y