MARCADORES
Rht-D1
Ellis et al. (2002) desarrollaron marcadores moleculares alelo específicos que permiten detectar las variantes alélicas Rht-D1a (alta) y Rht-D1b (enana). El marcador revela la presencia de una mutación C/T (Q62*) que genera un codón de stop TAG en el alelo Rht-D1b.
Los productos de PCR son visualizados en geles de agarosa al 2% teñidos con bromuro de etidio. La punta de flecha verde marca el fragmento de ADN de 264 pb perteneciente al alelo alto Rht-D1a (calles 1, 2, 3, 4, 6 y 7). La punta de flecha celeste marca el fragmento de 254 pb perteneciente sensible Rht-D1b (calle 5).
Primers:
Rht-D1a
DF 5′ CGC GCA ATT ATT GGC CAG AGA TAG 3′
WR2 5′ GGC CAT CTC GAG CTG CAC 3’
Rht-D1b
DF2 5′ GGC AAG CAA AAG CTT CGC G 3′
MR2 5′ CCC CAT GGC CAT CTC GAG CTG CTA 3’
Concentración final de productos utilizados en las reacciones de PCR:
1X Taq buffer (libre de Mg); dNTP: 200 µM c/u; MgCl2: 1.5 mM; primers: 0.2 µM c/u; Taq: 1 U; ADN genómico: 50-100 ng/reacción; Volumen final: 25 µl
Programa de PCR
Desnaturalización: 94 °C, 5 min; Touchdown 7 ciclos de 94 °C 30 seg, 65 °C 30 seg, 72 °C 1 min 20 seg; con una caída de 1°C de temperatura de annealing por ciclo. Luego, 30 ciclos de 94 °C 15 seg, 58 °C 15 seg, 72 °C 50 seg. Finalización con un paso de extensión: 72 °C 5 min.
Caracterización de la Variabilidad Genética presente en Variedades Argentinas de Trigo.
a = Alto; b = Bajo
Aclaración: Los datos de la caracterización molecular aquí mostrados pueden contener variaciones según el origen de las semillas utilizadas, se recomienda utilizarlos de manera orientativa.
Referencias
Ellis, M., Spielmeyer, W., Gale, K., Rebetzke, G., & Richards, R. (2002). “Perfect” markers for the Rht-B1b and Rht-D1b dwarfing genes in wheat. Theoretical and Applied Genetics, 105(6), 1038–1042. https://doi.org/10.1007/s00122-002-1048-4