MARCADORES
Ppd-D1
Beales et al. (2007) desarrollaron un marcador molecular codominante que permite detectar las variantes alélicas Ppd-D1a (insensible) y ppd-D1 (sensible). El marcador revela la presencia de una deleción de 2.089 pb en la región del promotor del gen Ppd-D1.
Productos de PCR separados en electroforesis en geles de agarosa al 2%.
Los productos de PCR son visualizados en geles de agarosa al 2% teñidos con bromuro de etidio. La punta de flecha roja marca el fragmento de ADN de 288 pb perteneciente al alelo insensible Ppd-D1a (calles 1, 5, 9, 10 y 11). La punta de flecha verde marca el fragmento de 414 pb perteneciente sensible ppd-D1 (calles 2, 3, 4, 6, 7 y 8). La punta de flecha amarilla señala el fragmento de 500 pb del marcador de peso molecular de 100 pb (Biodynamics).
Primers:
Ppd-D1F 5’ ACG CCT CCC ACT ACA CTG 3’
Ppd-D1R1 5’ GTT GGT TCA AAC CAG AGA GC 3’
Ppd-D1R2 5’ CAC TGG TGG TAG CTG AGA TT 3’
Concentración final de productos utilizados en las reacciones de PCR:
1X Taq buffer (libre de Mg); dNTP: 200 µM c/u; MgCl2: 1.5 mM; primers: 0.2 µM c/u; Taq: 1 U; ADN genómico: 50 – 100 ng/reacción; Volumen final: 25 µl
Programa de PCR
Desnaturalización: 94 °C, 5 min; Amplificación (40 ciclos); 94 °C 45 seg, 55 °C 45 seg, 72 °C 45 seg; Extensión: 72 °C 5 min
Caracterización de la Variabilidad Genética presente en Variedades Argentinas de Trigo.
s = alelo sensible; i = alelo insensible.
Aclaración: Los datos de la caracterización molecular aquí mostrados pueden contener variaciones según el origen de las semillas utilizadas, se recomienda utilizarlos de manera orientativa.
Referencias
Beales, J., Turner, A., Griffiths, S., Snape, J. W., & Laurie, D. A. (2007). A Pseudo-Response Regulator is misexpressed in the photoperiod insensitive Ppd-D1a mutant of wheat (Triticum aestivum L.). Theoretical and Applied Genetics, 115(5), 721–733. https://doi.org/10.1007/s00122-007-0603-4