MARCADORES
GW2-A1
Su et al. (2011) desarrollaron un marcador molecular CAPS que permite detectar las variantes alélicas del gen GW2-A1.
En primer lugar, se utiliza un conjunto de primers específicos para el genoma A Hap-6A-P1, para amplificar un fragmento de 949 pb de GW2-A1. Luego, un segundo par de primers Hap-6A-P2 fue diseñado para una segunda PCR donde se obtiene un producto de 418 pb. Por último, el producto de la segunda PCR se digiere con la endonucleasa TaqI, y se puede observar un polimorfismo de longitud de 167 pb (GW2-A1-A) vs., 218 pb (GW2-A1-G).
El alelo GW2-A1-G está asociado a un mayor peso de grano, mientras que el alelo GW2-A1-A está presente en variedades de peso de grano más pequeño (Zhang et al., 2013).
Productos de PCR separados en electroforesis en geles de agarosa al 2%.
Los productos de PCR son visualizados en geles de agarosa al 2% teñidos con bromuro de etidio.
La punta de flecha roja (calles 1, 2, 3 y 4) marca el fragmento de ADN de 218 pb perteneciente al alelo GW2-A1-G. La punta de flecha verde (calles 5, 6 y 7) marca el fragmento de 167 pb perteneciente al alelo GW2-A1-A. La punta de flecha amarilla señala el fragmento de 500 pb del marcador de peso molecular de 100 pb (Biodynamics).
Primers:
Las secuencias son las siguientes (Su et al., 2011):
Hap-6A P1
Hap-6A P1F: 5´ -CGT TAC CTC TGG TTT GGG TGT CGT G-3’ ;
Hap-6A P1R: 5’ -CAC CTC TCG AAA ATC TTC CCA ATT A-3’ .
Hap-6A-P2
Hap-6A-P2F: 5’ – GAG AAA GGG CTG GTG CTA TGG A-3’ ;
Hap-6A-P2R: 5’ – GTA ACG CTT GAT AAA CAT AGG TAA T-3’
Concentración final de productos y programa de primer PCR:
1X Taq buffer (libre de Mg); dNTP: 200 µM c/u; MgCl2: 1.5 mM; primers: 0.2 µM c/u; Taq: 1 U; ADN genómico: 50 – 100 ng/reacción; Volumen final: 25 µl
Desnaturalización: 94 °C, 5 min; Amplificación (40 ciclos); 94 °C 45 seg, 55 °C 45 seg, 72 °C 45 seg; Extensión: 72 °C 5 min.
Concentración final de productos y programa de segunda PCR:
1X Taq buffer (libre de Mg); dNTP: 200 µM c/u; MgCl2: 1.5 mM; primers: 0.2 µM c/u; Taq: 1 U; como templado se adicionaran 2 µl de la primera PCR ; Volumen final: 25 µl
Desnaturalización: 94 °C, 4 min; Amplificación (40 ciclos); 94 °C 45 segundos, 50 °C 45 segundos, 72 °C 45 segundos; Extensión: 72 °C 15 min
Programa de digestión: 10 µl de producto de la segunda PCR + 4 µl ddH2O + 1U enzima TaqI a 65 °C durante 2 horas.
Caracterización de la Variabilidad Genética presente en Variedades Argentinas de Trigo.
| GW2-A1 | Variedad |
|---|---|
|
G |
362, 365, 55CL, 915, 916, 920, ACA 201, ACA 202, ACA 308, ACA 320, ACA 360, ACA 602, ACA 604, ACA 608, ACA 901, ACA 906, ACA 917, ALAMO, ALHAMBRA, BAGUETTE 10, BAGUETTE 18, BAGUETTE 19, BAGUETTE 21, BAGUETTE 31, BAGUETTE 450, BAGUETTE 620, BAGUETTE 680, BAGUETTE 750, BAGUETTE 9, BAGUETTE P. 11, BARLETTA 77, BASILIO, BIOCERES 1008, BIOINTA 1000, BIOINTA 1001, BIOINTA 1002, BIOINTA 1003, BIOINTA 1004, BIOINTA 1005, BIOINTA 1006, BIOINTA 2001, BIOINTA 2004, BIOINTA 3003, BIOINTA 3004, BIOINTA 3005, BUCK AGP FAST, BUCK BAQUEANO, BUCK BIGUA, BUCK CAMBA, BUCK CHACARERO, BUCK COLIHUE, BUCK CUMELEN, BUCK DESTELLO, BUCK FULGOR, BUCK GUAPO, BUCK HUANCHEN, BUCK MALEVO, BUCK MANGRULLO, BUCK METEORO, BUCK MUTICIA, BUCK NAPOSTA, BUCK NORTEÑO, BUCK PACIFICO, BUCK PEREGRINO, BUCK RANQUEL, BUCK RESPLANDOR, BUCK SAETA, BUCK TAITA, CEDRO, CEIBO, DM ALERCE, DM ALGARROBO, DM AREX, DM ATLAX, DM CRONOX, DM MAITEN, DM PEHUEN, DM SAUCE, DM THEMIX, FRESNO, GUAYABO, HO CARCARAÑA, INIA CENTINELA, INIA CHURRINCHE, INIA CONDOR, JACARANDA, KLEIN 100 AÑOS, KLEIN 32, KLEIN ATLAS, KLEIN BRUJO, KLEIN CACIQUE, KLEIN CAPRICORNIO, KLEIN CARPINCHO, KLEIN CASTOR, KLEIN CENTAURO, KLEIN CHAJA, KLEIN DONENRIQUE, KLEIN ESCORPION, KLEIN FAVORITO II, KLEIN GAVILAN, KLEIN GEMINIS, KLEIN GLADIADOR, KLEIN GUERRERO, KLEIN IMPACTO, KLEIN LEON, KLEIN MINERVA, KLEIN NUTRIA, KLEIN POTRO, KLEIN RAYO, KLEIN RENDIDOR, KLEIN SELENIO CL, KLEIN TIGRE, KLEIN TITANIO CL, KLEIN YARARA, KLEIN ZORRO, LAPACHO, LE 2331, LE 2341, LG ARLASK, LG PAMPERO, LG ZAINO, MS INTA 119, MS INTA 415, MS INTA 623 CL, MS INTA 815, MS INTA BON. 817, PROINTA GAUCHO, PROINTA GUAZU, RAGT QUIRIKO, RELMO SIRIRI, SINVALOCHO, SRN NOGAL, SY 100, SY 109, SY 120, SY 200, SY 200, SY 211, SY 300, SY 330, TIMBO, TORDO IS |
|
A |
ACA 223, ACA 801, ACA 903B, BAGUETTE 17, BAGUETTE 30, BUCK 75 ANIVERSARIO, BUCK BRASIL, BUCK PINGO, BUCK PRONTO, BUCK PUELCHE, HORNERO IS, INIA TORCAZA, KLEIN PANTERA, KLEIN PROMETEO, KLEIN PROTEO, KLEIN TAURO, LE 2330, LE 2333, MARCOS JUAREZ INTA, OLAETA ARTILLERO, PROINTA ELITE, PROINTA GRANAR, PROINTA ISLA VERDE, PROINTA OASIS |
G = mayor peso de grano, A = menor peso de grano.
Aclaración: Los datos de la caracterización molecular aquí mostrados pueden contener variaciones según el origen de las semillas utilizadas, se recomienda utilizarlos de manera orientativa.
Referencias
Su, Z., Hao, C., Wang, L., Dong, Y., & Zhang, X. (2010). Identification and development of a functional marker of TaGW2 associated with grain weight in bread wheat (Triticum aestivum L.). Theoretical and Applied Genetics, 122(1), 211-223. https://doi.org/10.1007/s00122-010-1437-z
- Zhang, X., Chen, J., Shi, C., Chen, J., Zheng, F., & Tian, J. (2013). Function of TaGW2-6A and its effect on grain weight in wheat (Triticum aestivum L.). Euphytica, 192(3), 347-357. https://doi.org/10.1007/s10681-012-0858-y