GW2-A1

MARCADORES

GW2-A1

Su et al. (2011) desarrollaron un marcador molecular CAPS que permite detectar las variantes alélicas del gen GW2-A1.
En primer lugar, se utiliza un conjunto de primers específicos para el genoma A Hap-6A-P1, para amplificar un fragmento de 949 pb de GW2-A1. Luego, un segundo par de primers Hap-6A-P2 fue diseñado para una segunda PCR donde se obtiene un producto de 418 pb. Por último, el producto de la segunda PCR se digiere con la endonucleasa TaqI, y se puede observar un polimorfismo de longitud de 167 pb (GW2-A1-A) vs., 218 pb (GW2-A1-G).

El alelo GW2-A1-G está asociado a un mayor peso de grano, mientras que el alelo GW2-A1-A está presente en variedades de peso de grano más pequeño (Zhang et al., 2013).

Productos de PCR separados en electroforesis en geles de agarosa al 2%.
Los productos de PCR son visualizados en geles de agarosa al 2% teñidos con bromuro de etidio.
La punta de flecha roja (calles 1, 2, 3 y 4) marca el fragmento de ADN de 218 pb perteneciente al alelo GW2-A1-G. La punta de flecha verde (calles 5, 6 y 7) marca el fragmento de 167 pb perteneciente al alelo GW2-A1-A. La punta de flecha amarilla señala el fragmento de 500 pb del marcador de peso molecular de 100 pb (Biodynamics).

Primers:

Las secuencias son las siguientes (Su et al., 2011):
Hap-6A P1
Hap-6A P1F: 5´ -CGT TAC CTC TGG TTT GGG TGT CGT G-3’ ;
Hap-6A P1R: 5’ -CAC CTC TCG AAA ATC TTC CCA ATT A-3’ .

Hap-6A-P2  
Hap-6A-P2F: 5’ – GAG AAA GGG CTG GTG CTA TGG A-3’ ;
Hap-6A-P2R: 5’ – GTA ACG CTT GAT AAA CAT AGG TAA T-3’

Concentración final de productos y programa de primer PCR:

1X Taq buffer (libre de Mg); dNTP: 200 µM c/u; MgCl2: 1.5 mM; primers: 0.2 µM c/u; Taq: 1 U; ADN genómico: 50 – 100 ng/reacción; Volumen final: 25 µl
Desnaturalización: 94 °C, 5 min; Amplificación (40 ciclos); 94 °C 45 seg, 55 °C 45 seg, 72 °C 45 seg; Extensión: 72 °C 5 min.

Concentración final de productos y programa de segunda PCR:

1X Taq buffer (libre de Mg); dNTP: 200 µM c/u; MgCl2: 1.5 mM; primers: 0.2 µM c/u; Taq: 1 U; como templado se adicionaran 2 µl de la primera PCR ; Volumen final: 25 µl
Desnaturalización: 94 °C, 4 min; Amplificación (40 ciclos); 94 °C 45 segundos, 50 °C 45 segundos, 72 °C 45 segundos; Extensión: 72 °C 15 min
Programa de digestión: 10  µl de producto de la segunda PCR + 4 µl ddH2O + 1U enzima TaqI a 65 °C durante 2 horas.

Caracterización de la Variabilidad Genética presente en Variedades Argentinas de Trigo.

G = mayor peso de grano, A = menor peso de grano.

Aclaración: Los datos de la caracterización molecular aquí mostrados pueden contener variaciones según el origen de las semillas utilizadas, se recomienda utilizarlos de manera orientativa.

Referencias

  • Su, Z., Hao, C., Wang, L., Dong, Y., & Zhang, X. (2010). Identification and development of a functional marker of TaGW2 associated with grain weight in bread wheat (Triticum aestivum L.). Theoretical and Applied Genetics, 122(1), 211-223. https://doi.org/10.1007/s00122-010-1437-z

  • Zhang, X., Chen, J., Shi, C., Chen, J., Zheng, F., & Tian, J. (2013). Function of TaGW2-6A and its effect on grain weight in wheat (Triticum aestivum L.). Euphytica, 192(3), 347-357. https://doi.org/10.1007/s10681-012-0858-y

Trigueros

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