MARCADORES
FT-D1
Este marcador permite diferenciar la variante alélica tardía, provocada por una deleción puntual de una guanina (G) en el exón 3, del alelo salvaje precoz para el gen FT-D1 (Bonnin et al., 2007).
En base a la mutación descripta por Bonnin et al. (2007), Chen et al. (2010) desarrollaron un marcador de PCR tipo CAPS para detectar el alelo precoz y tardío para el gen FT-D1 (Vrn-D3). Para poder diferenciar los alelos luego de la amplificación por PCR, los productos son digeridos con la enzima de restricción NcoI. El alelo salvaje precoz, sin la deleción, presenta un producto de digestión de 401 pb (punta de flecha verde, calles 1-4, 6-8, 12). Por otro lado, el alelo tardío con la deleción puntual muestra productos de digestión 375 + 27 pb (punta de flecha celeste, calles 5, 9, 10, 12-14).
Los productos de digestión son visualizados en geles de acrilamida al 8% en buffer TBE 1X y teñidos con bromuro de etidio. Las puntas de flechas negras marcan los fragmentos de 500, 400 y 300 pb del marcador de peso molecular 100 pb (Biodynamics).
Primers
VRN-D3-F6: 5’- CTT CTA TTC ACA TGT TTC GTT CAT G -3’
VRN-D3-R8: 5’- ACG AGC ACG AAG CGA TGG ATC GC -3’
Concentración final de productos utilizados en las reacciones de PCR:
1X Taq buffer (libre de Mg); dNTP: 200 µM c/u; MgCl2: 1.5 mM; primers: 0.2 µM c/u; Taq: 1 U; ADN genómico: 50-100 ng/reacción; Volumen final: 25 µl.
Programa de PCR:
Desnaturalización: 94 °C, 5 min; Amplificación (40 ciclos); 94 °C 30 seg, 59 °C 30 seg, 72 °C 45 seg; Extensión: 72 °C 5 min
Digestión
10 µl de producto de PCR, 2 U de enzima (Nco I), 1X de buffer de enzima, 5 µl de ddH20. Digerir 2-3 hs a 37 °C
Caracterización de la Variabilidad Genética presente en Variedades Argentinas de Trigo.
| FT-D1 | Variedad |
|---|---|
|
a |
55CL, ACA 201, ACA 801, ACA 906, BAGUETTE 31, BAGUETTE 802, BASILIO, BIOINTA 2001, BIOINTA 2004, BIOINTA 3003, BIOINTA 3004, BIOINTA 3005, BUCK AGP FAST, BUCK CHACARERO, BUCK GUAPO, BUCK MALEVO, BUCK MANGRULLO, BUCK NORTEÑO, BUCK PINGO, BUCK PRONTO, BUCK SAETA, BUCK TAITA, CEIBO, DM CRONOX, GINGKO, KLEIN CACIQUE, KLEIN CAPRICORNIO, KLEIN CARPINCHO, KLEIN CENTAURO, KLEIN CHAJA, KLEIN DONENRIQUE, KLEIN ESCORPION, KLEIN GAVILAN, KLEIN GLADIADOR, KLEIN GUERRERO, KLEIN NUTRIA, KLEIN POTRO, KLEIN PROTEO, KLEIN TIGRE, KLEIN YARARA, LE 2425, MS INTA 415, MS INTA 617, MS INTA 815, MS INTA 816, SRN NOGAL, SY 120 |
|
b |
ACA 202, ACA 223, ACA 320, ACA 901, ACA 903B, ACA 907, BAGUETTE 10, BAGUETTE 17, BAGUETTE 18, BAGUETTE 19, BAGUETTE 21, BAGUETTE 30, BAGUETTE 450, BAGUETTE 501, BAGUETTE 550, BAGUETTE 620, BAGUETTE 750, BAGUETTE 9, BAGUETTE P. 11, BARLETTA 77, BIOINTA 1000, BIOINTA 1001, BIOINTA 1002, BIOINTA 1003, BIOINTA 1005, BIOINTA 1006, BUCK 75 ANIVERSARIO, BUCK BAQUEANO, BUCK BIGUA, BUCK BRASIL, BUCK HUANCHEN, BUCK METEORO, BUCK NAPOSTA, BUCK PUELCHE, BUCK RANQUEL, BUCK RESPLANDOR, DM ALGARROBO, DM AREX, DM ATLAX, DM ONIX, DM ÑANDUBAY, INIA CENTINELA, INIA CHURRINCHE, INIA CONDOR, KLEIN 100 AÑOS, KLEIN 32, KLEIN BRUJO, KLEIN CASTOR, KLEIN IMPACTO, KLEIN LEON, KLEIN PANTERA, KLEIN RAYO, KLEIN TAURO, KLEIN VALOR, KLEIN ZORRO, LE 2330, LE 2331, LE 2333, LE 2341, MARCOS JUAREZ INTA, OLAETA ARTILLERO, PROINTA GAUCHO, PROINTA GRANAR, SY 100, SY 200, SY 300 |
a = sin deleción, alelo funcional; b = con deleción, alelo nulo.
Aclaración: Los datos de la caracterización molecular aquí mostrados pueden contener variaciones según el origen de las semillas utilizadas, se recomienda utilizarlos de manera orientativa.
Referencias
- Bonnin, I., Rousset, M., Madur, D., Sourdille, P., Dupuits, C., Brunel, D., & Goldringer, I. (2007). FT genome A and D polymorphisms are associated with the variation of earliness components in hexaploid wheat. Theoretical and Applied Genetics, 116(3), 383–394. https://doi.org/10.1007/s00122-007-0676-0
- Chen, Y., Carver, B. F., Wang, S., Cao, S., & Yan, L. (2010). Genetic regulation of developmental phases in winter wheat. Molecular Breeding, 26(4), 573–582. https://doi.org/10.1007/s11032-010-9392-6