MARCADORES
Rht-B1
Ellis et al. (2002) desarrollaron marcadores moleculares alelo específicos que permiten detectar las variantes alélicas Rht-B1a (alta) y Rht-B1b (enana). El marcador revela la presencia de una mutación C/T (Q62*) que genera un codón de stop TAG en el alelo Rht-B1b.
Los productos de PCR son visualizados en geles de agarosa al 2% teñidos con bromuro de etidio. La punta de flecha verde marca el fragmento de ADN de 237 pb perteneciente al alelo alto Rht-B1a (calles 2, 3, 4 y 7). La punta de flecha celeste marca el fragmento de 237 pb perteneciente al alelo enano Rht-B1b (calles 1, 4, 5 y 6).
Primers:
Rht-B1a
BF 5′ GGT AGG GAG GCG AGA GGC GAG 3′
WR1 5′ CAT CCC CAT GGC CAT CTC GAG CTG 3’
Rht-B1b
BF
MR1 5′ CAT CCC CAT GGC CAT CTC GAG CTA 3′
Concentración final de productos utilizados en las reacciones de PCR:
1X Taq buffer (libre de Mg); dNTP: 200 µM c/u; MgCl2: 1.5 mM; primers: 0.2 µM c/u; Taq: 1 U; ADN genómico: 50-100 ng/reacción; Volumen final: 25 µl
Programa de PCR
Desnaturalización: 94 °C, 5 min; Touchdown 7 ciclos de 94 °C 30 seg, 65 °C 30 seg, 72 °C 1 min 20 seg; con una caída de 1°C de temperatura de annealing por ciclo. Luego, 30 ciclos de 94 °C 15 seg, 58 °C 15 seg, 72 °C 50 seg. Finalización con un paso de extensión: 72 °C 5 min.
Caracterización de la Variabilidad Genética presente en Variedades Argentinas de Trigo.
a = Alto; b = Bajo.
Aclaración: Los datos de la caracterización molecular aquí mostrados pueden contener variaciones según el origen de las semillas utilizadas, se recomienda utilizarlos de manera orientativa.
Referencias
- Ellis, M., Spielmeyer, W., Gale, K., Rebetzke, G., & Richards, R. (2002). “Perfect” markers for the Rht-B1b and Rht-D1b dwarfing genes in wheat. Theoretical and Applied Genetics, 105(6), 1038–1042. https://doi.org/10.1007/s00122-002-1048-4